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本试剂盒基于LAMP这一新型核酸扩增技术，通过加入SYBR Green染料对LAMP扩增进行实时监测，需要配备荧光定量PCR仪或恒温扩增荧光检测仪，且对引物的要求比较高，特异性高的引物可更好的避免假阳性的出现。本试剂盒内含性能卓越的Bst4.0 DNA聚合酶，既可以扩增DNA，也可以直接扩增RNA分子。

LAMP是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖于Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30～60分钟内DNA扩增可达10⁹～10¹⁰倍。

Bst DNA聚合酶是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分，具有很强的链置换活性，以及5’→3’的DNA聚合酶活性，因此可以应用于LAMP(Loop-mediated isothermal amplification)检测实验。

• Lyophilized LAMP SYBR Green Reagent为冻干粉形式，包含Bst DNA聚合酶4.0、dNTPs等，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用前每瓶用0.75mL的LAMP Buffer溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。
  
• 按以下组分配置反应混合液：
  

  成分	用量
  溶解后的LAMP SYBR Green Reagent	15μL
  LAMP Primer Mix	0.5 or 1 or 1.5μL
  模板DNA or RNA	1μL
  ddH2O	至20μL

  • 首次实验时LAMP Primer Mix分别采用0.5、1、1.5μL进行实验测试。
• 荧光定量PCR仪的设置LAMP SYBR Green的检测可以使用标准定量PCR仪（也可使用恒温荧光设备）。
  使用定量PCR仪进行LAMP SYBR Green扩增程序：
  步骤1：60℃ 10s
  步骤2：60℃ 50s收集信号，循环25次
  总反应时间为25min。
  注：在LAMP反应结束后禁止将反应管盖打开，否则可能会导致气溶胶污染。一旦发生气溶胶污染，请使用我司的DNA气溶胶污染去除剂（货号：MT3001）进行环境清理。

• LAMP Primer Mix浓度：FIP/BIP分别为16μM、LoopF/B分别为8μM、F3/B3分别为2μM。
  
• 对成功建立LAMP检测方法至关重要的四个参数分别是：引物位置、引物使用浓度、反应温度（60～65℃）和反应时间。引物使用浓度、反应温度是优先要确认的参数，如经过参数调整后仍不能达到检测用标准，则重新设计引物组合，再进行测试。